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ELISA實(shí)驗(yàn)中緩沖溶液等試劑的配置
ELISA實(shí)驗(yàn)中是以抗原和抗體的免疫反應(yīng)為基礎(chǔ)，ELISA試劑以及各種溶液如何配置？zui近剛做了下ELISA實(shí)驗(yàn)，把各種ELISA配置方法匯總?cè)缦拢?/span>
1、ELISA實(shí)驗(yàn)包被緩沖液
2、ELISA實(shí)驗(yàn)洗滌緩沖液
3、ELISA實(shí)驗(yàn)稀釋液
4、ELISA實(shí)驗(yàn)終止液
5、ELISA底物緩沖液
6、ELISA實(shí)驗(yàn)TMB四甲基聯(lián)苯胺、使用液
7、ELISA實(shí)驗(yàn)ABTS使用液
8、ELISC
試劑
1、ELISA實(shí)驗(yàn)包被緩沖液(PH9.6 0.05M碳酸鹽緩沖液)：
| NaHCO3 | 1.59g |
| NaHCO3 | 2.93g |
| 加蒸餾水至1000ml | |
2、ELISA實(shí)驗(yàn)洗滌緩沖液(PH7.4 PBS)：0.15M
| KH2PO4 | 0.2g |
| Na2HPO4·12H2O | 2.9g |
| NaCl | 8g |
| KCl | 0.2g |
| Tween-20 0.05% | 0.5ml |
| 加蒸餾水至1000ml | |
3、ELISA實(shí)驗(yàn)稀釋液：
牛血清白蛋白(BSA) 0.1g
加洗滌緩沖液至100ml
或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10%使用。
4、ELISA實(shí)驗(yàn)終止液(2M H2SO4)：
蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸98%、21.7ml。
5、ELISA底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸)：
| 0.2M Na2HPO4(28.4g/L) | 25.7ml |
| 0.1M 檸檬酸(19.2g/L) | 24.3ml |
| 加蒸餾水50ml | |
6、ELISA實(shí)驗(yàn)TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液：
| TMB(10mg/5ml無水乙醇) | 0.5ml |
| 底物緩沖液(PH5.5) | 10ml |
| 0.75%H2O2 | 32μl |
7、ELISA實(shí)驗(yàn)ABTS使用液：
| ABTS | 0.5mg |
| 底物緩沖液(PH5.5) | 1ml |
| 3%H2O2 | 2μl |
8、ELISA實(shí)驗(yàn)封閉液：
牛血清白蛋白(BSA) 5g
加洗滌緩沖液至100ml
值得一提的是有的封閉液中含有脫脂奶粉，不適合長期保存。
為了保證ELISA實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，實(shí)驗(yàn)操作中加入的緩沖液和各組分一定要，將洗滌液加入酶標(biāo)板中的時(shí)候防止加入的試劑混入另外一個(gè)酶標(biāo)孔，嚴(yán)防交叉污染。
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