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    ELISA實(shí)驗(yàn)中緩沖溶液等試劑的配置

    更新時(shí)間:2017-08-04 點(diǎn)擊量:1270

    ELISA實(shí)驗(yàn)中緩沖溶液等試劑的配置

    ELISA實(shí)驗(yàn)中是以抗原和抗體的免疫反應(yīng)為基礎(chǔ),ELISA試劑以及各種溶液如何配置?zui近剛做了下ELISA實(shí)驗(yàn),把各種ELISA配置方法匯總?cè)缦拢?/span>
    1、ELISA實(shí)驗(yàn)包被緩沖液
    2、ELISA實(shí)驗(yàn)洗滌緩沖液
    3、ELISA實(shí)驗(yàn)稀釋液
    4、ELISA實(shí)驗(yàn)終止液
    5、ELISA底物緩沖液
    6、ELISA實(shí)驗(yàn)TMB四甲基聯(lián)苯胺、使用液
    7、ELISA實(shí)驗(yàn)ABTS使用液
    8、ELISC

    試劑

    1、ELISA實(shí)驗(yàn)包被緩沖液(PH9.6 0.05M碳酸鹽緩沖液):

    NaHCO31.59g
    NaHCO32.93g
    加蒸餾水至1000ml


    2、ELISA實(shí)驗(yàn)洗滌緩沖液(PH7.4 PBS):0.15M

    KH2PO4 0.2g
    Na2HPO4·12H2O2.9g
    NaCl 8g
    KCl0.2g
    Tween-20 0.05%0.5ml
    加蒸餾水至1000ml


    3、ELISA實(shí)驗(yàn)稀釋液:
    牛血清白蛋白(BSA) 0.1g
    加洗滌緩沖液至100ml
    或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5~10%使用。

    4、ELISA實(shí)驗(yàn)終止液(2M H2SO4):
    蒸餾水178.3ml,逐滴加入濃硫酸98%、21.7ml。

    5、ELISA底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸):

    0.2M Na2HPO4(28.4g/L) 25.7ml
    0.1M 檸檬酸(19.2g/L)24.3ml
    加蒸餾水50ml


    6、ELISA實(shí)驗(yàn)TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液:

    TMB(10mg/5ml無水乙醇)0.5ml
    底物緩沖液(PH5.5)10ml
    0.75%H2O2 32μl


    7、ELISA實(shí)驗(yàn)ABTS使用液:

    ABTS0.5mg
    底物緩沖液(PH5.5)1ml
    3%H2O22μl


    8、ELISA實(shí)驗(yàn)封閉液:
    牛血清白蛋白(BSA) 5g
    加洗滌緩沖液至100ml
    值得一提的是有的封閉液中含有脫脂奶粉,不適合長期保存。

    為了保證ELISA實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性,實(shí)驗(yàn)操作中加入的緩沖液和各組分一定要,將洗滌液加入酶標(biāo)板中的時(shí)候防止加入的試劑混入另外一個(gè)酶標(biāo)孔,嚴(yán)防交叉污染。

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