酵母菌基因組DNA的提取

酵母菌基因組DNA的提取

一：儀器：同方法一 二：試劑：SE緩沖液（1M*，0.1MEDTA pH7.5）；*（50mg/ml）；20％PVP；蛋白酶K緩沖液（10mM Tris pH7.6 0.5% SDS 1mM EDTA）；其余同前三：操作  1.5ml  對數生長期細菌細胞         離心，12000rpm,1-2min       沉淀         溶于590ulSE緩沖液中混勻+10ul*37℃,1hr             離心，12000rpm,8-10min           沉淀溶于100μL，0.5μl蛋白酶Ｋ，混勻，37℃,1hr              加入1.2ml的CTAB/NaCL,200μl20%PVP 混勻  65℃,30min等體積酚//異戊醇混合液,混勻,離心,12000rpm,4-5min          上清,上清液 
2V無水乙醇、1/10VnaAC, 
-20,2或-80℃，30min 
                                 10000RPM,10min 
沉 淀  
70%冷乙醇洗滌 
真空干燥 干粉-20℃保存， 
或復溶于0.5-1mlTE或水中,分裝成小體積, -20℃或4℃保存 
 
四：鑒定  
所提DNA進行Agarose膠分析（電泳過程見附），紫外觀測儀觀測，凝膠成像系統拍攝。